Uso Previsto
Para uso diagnóstico in vitro. Este producto está destinado para inmunohistoquímica cualitativa con secciones de tejidos, fijados con formalina, embebidos en parafina, normal y neoplásico para ser visto por microscopía de luz. La interpretación clínica de los resultados de la tinción debe ir acompañada de los estudios histológicos con los controles adecuados. Las historias clínicas de los pacientes y otras pruebas diagnósticas pertinentes deben ser utilizadas por una(s) persona(s) calificada(s) al evaluar e interpretar los resultados.
Resumen y Explicación
Este anticuerpo reconoce una proteína c-erbB-2, que es un receptor de la tirosina quinasa de la familia c-erbB. Está estrechamente relacionada en su estructura con el receptor del factor de crecimiento epidérmico. La oncoproteína c-erbB-2 se detecta en un alto porcentaje de adenocarcinoma de mama y está asociada con los cánceres de mama más agresivos y de mal pronóstico. En el caso del cáncer de mama, se ha demostrado que la expresión de HER2 mediante la inmunohistoquímica está asociada con un mal pronóstico clínico.
Formato
Este producto se suministra como un sobrenadante de cultivo de tejidos y contiene azida sódica como conservante.
Principios de los Procedimientos
La detección de antígenos por inmunohistoquímica (IHC) es un proceso de dos etapas que implica en primer lugar, la unión de un anticuerpo primario contra el antígeno de interés, y segundo, la detección del anticuerpo unido por un cromógeno. El anticuerpo primario puede ser usado en IHQ, usando técnicas manuales o mediante el Sistema de Tinción de Diagnostic BioSystems Automated Montage 360™.
Dilución del Anticuerpo Primario
Los anticuerpos listos para usar de Diagnostic BioSystems han sido optimizados para utilizarlos con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado y no requieren dilución adicional. La dilución adicional puede resultar en la pérdida de sensibilidad. El usuario debe validar cualquier cambio.
Materiales Necesarios, Pero No Suministrados
Algunos de los reactivos y materiales necesarios para IHQ no se proporcionan. Los reactivos de pretratamiento, sistemas de detección, reactivos de control y otros reactivos auxiliares están disponibles en Diagnostic BioSystems. Por favor diríjase a la página web de Diagnostic BioSystems: www.dbiosys.com.
Almacenamiento y Manipulación
Almacenar a 2-8°C. Este anticuerpo es adecuado para su uso hasta la fecha de caducidad cuando se almacena a 2-8°C. No utilice el producto después de la fecha de caducidad impresa en el vial. Si los reactivos se almacenan en condiciones distintas de las especificadas aquí, deben ser verificados por el usuario. Los reactivos diluidos deben utilizarse con prontitud. Las porciones no utilizadas de preparación de anticuerpos deben desecharse después de un día.
La presencia de precipitado o un olor inusual indica que el anticuerpo se deteriora y no se debe utilizar.
Controles Positivos y Negativos
Los controles positivos y negativos deben ejecutarse simultáneamente con todas las muestras de pacientes. Si se observa una tinción inesperada que no puede explicarse por las variaciones en los procedimientos de laboratorio y se sospecha un problema con el anticuerpo, póngase en contacto con el Soporte Técnico de Diagnostic BioSystems al (925) 484-3350, extensión 2 o techsupport@dbiosys.com.
Recogida y Preparación de Muestras
Los tejidos fijados en formalina al 10% son adecuados para su uso antes de la inclusión en parafina. Consultar las referencias (Kiernan, 1981; Sheehan y Hrapchak, 1980) para más detalles sobre la preparación de muestras.
Se recomienda al usuario validar el uso de los productos con sus muestras de tejido preparado y manipularlas de acuerdo con sus prácticas de laboratorio.
Precauciones
Este anticuerpo contiene menos de 0,1% de azida sódica. Las concentraciones de menos de 0,1% no son materiales peligrosos notificados según US 29 CFR 1910.1200, OSHA de Comunicación de Riesgos y la Directiva 91/155/CE. El azida de sodio (NaN3) usado como un conservante es tóxico si se ingiere. La azida de sodio puede reaccionar con tuberías de plomo y cobre para formar azidas metálicas altamente explosivas. Tras la eliminación, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la acumulación de azida en las cañerías (Centro para el Control de Enfermedades, 1976, Instituto Nacional de Seguridad y Salud Ocupacional, 1976). Las muestras, antes y después de la fijación y todos los materiales expuestos a ellos, deben ser manejados como si fueran capaces de transmitir infecciones y desecharse con las precauciones adecuadas. Nunca pipetear reactivos con la boca y evitar el contacto con la piel y las membranas mucosas con los reactivos y muestras. Si los reactivos o muestras entran en contacto con zonas sensibles, lavar con cantidades copiosas de agua. La contaminación microbiana de los reactivos puede resultar en un aumento de la tinción no específica. Los tiempos de incubación o temperaturas diferentes de los especificados pueden dar resultados erróneos. El usuario debe validar cualquier cambio. El MSDS está disponible bajo petición.
Tratamiento de los Tejidos Antes de la Tinción
Coloque los portaobjetos en la solución de recuperación de antígenos recomendada usando el Sistema de recuperación de antígeno de Diagnostic BioSystems, Montage Opus™. Permitir enfriar las laminillas durante 20 minutos antes de la tinción.
Procedimiento de Tinción
Consulte la siguiente tabla para conocer las condiciones recomendadas específicamente para este anticuerpo. Consulte el sistema de detección de Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus de dos pasos, o Sistema de Detección de Montaje PolyVue Plus™ Auto para obtener orientación sobre los protocolos de tinción específicos u otros requisitos.
| Parámetro | Recomendaciones Diagnostic BioSystems |
|---|---|
| Control positivo | Carcinoma de mama |
| Dilución del concentrado | 1:25–1:50 |
| El pretratamiento | Citrato Buffer pH 6,0 |
| Tiempo de incubación y temperatura | 30 min a RT |
| Sistema de Detección | PolyVue™ Plus—Sistema de detección de dos pasos o Sistema de detección automática Montaje PolyVue Plus™ para usar con el Montaje Sistema 360 |
| Tipo de tejido | FFPE |
Control de Calidad
Consulte las Normas de Calidad del CLSI para el Diseño e Implementación de ensayos de Inmunohistoquímica; Pauta aprobada Segunda edición (E / LA28-A2) CLSI Wayne, PA EE.UU. (www.clsi.org). 2011.
Solución de Problemas
Contacto con el soporte técnico de Diagnostic BioSystems al (925) 484-3350, extensión 2, techsupport@dbiosys.com o con su Distribuidor local para informar coloración inusual.
Localización Celular
Membrana celular
Limitaciones del Procedimiento
La inmunohistoquímica es una técnica compleja que implica ambos métodos de detección histológicos e inmunológicos. El procesamiento de tejidos y la manipulación antes de la inmuno-tinción también puede causar resultados inconsistentes. Las variaciones en la fijación y la incrustación o de la naturaleza inherente del tejido pueden causar variaciones en los resultados (Nadji y Morales, 1983). La actividad de la peroxidasa endógena o actividad pseudo-peroxidasa en los eritrocitos y la biotina endógena pueden causar tinción no específica en función del sistema de detección utilizado. Los tejidos que contienen superficie de hepatitis B antígeno (HBsAg) pueden dar un falso positivo con los sistemas de peroxidasa de rábano (Omata et al. 1980). Una contra tinción y preparaciones inadecuadas pueden comprometer la interpretación de los resultados.
Características de Presentación
La dilución óptima del anticuerpo y los protocolos para una aplicación específica pueden variar. Estos incluyen, pero no se limitan a: la fijación, el método de recuperación de calor, los tiempos de incubación, y el espesor de sección de tejido y el kit de detección utilizado. Debido a la sensibilidad superior de estos reactivos únicos, los tiempos y los títulos de listados de incubación recomendados no son aplicables a otros sistemas de detección, ya que los resultados pueden variar. Las recomendaciones y los protocolos de hoja de datos se basan en el uso exclusivo de los productos Diagnostic BioSystems. En última instancia, es responsabilidad del investigador el determinar las condiciones óptimas. Estos productos son herramientas que pueden utilizarse para la interpretación de los resultados morfológicos en conjunción con otras pruebas de diagnóstico y los datos clínicos pertinentes por un patólogo cualificado.
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