El CD10 (EP195) es un anticuerpo monoclonal de conejo dirigido a un fragmento recombinante que corresponde a los residuos de la proteína CD10 humana. Este producto está diseñado para inmunohistoquímica cualitativa con secciones de tejidos, fijado con formalina, embebidos en parafina, normal y neoplásico para ser visto por microscopía de luz. La interpretación clínica de los resultados de la tinción debe ir acompañada de los estudios histológicos con los controles adecuados. Las historias clínicas de los pacientes y otras pruebas diagnósticas pertinentes deben ser utilizados por una persona (s) calificada al evaluar e interpretar los resultados.
Resumen y explicación:
El antígeno común de la leucemia linfoblástica aguda (CALLA/CD10) es una metalo-endopeptidasa de transmembrana de tipo II que cliva e inactiva una variedad de factores de crecimiento peptídico importantes para la invasión de tumores, angiogénesis, la inflamación, la biomnesia y la apoptosis. CD10 se expresa mediante un número de células hematopoyéticas incluyendo B y T inmaduras, células B de centros germinales y de los folículos linfáticos y granulocitos. También reacciona con una variedad de células no hematopoyéticas, incluidas las células de epitelio del tracto gastrointestinal y riñón. Un alto nivel de, canalículo biliar muestra un epítopo de glicoproteína de 100 kd derivado de. El CD10 se ha utilizado para la identificación y clasificación de las leucemias agudas de linfocitos, células de linfocitos B, linfoma, linfoma de Burkitt, y algunos linfomas en adultos. También se ha observado en un marcador de las células del estroma endometrio. Es útil para diferenciar carcinoma estromal (LMS) del leiomioma celular uterino (LUC) y del leiomiosarcoma uterino (LIU).
Formato:
Este anticuerpo se purifica por afinidad y se diluye en una solución salina tamponada con fosfato (PBS) de 10 mM, con un pH de 7,5, que contiene un 1% de albúmina sérica bovina (BSA) y un 0,05% de azida sódica (NaN3) como conservante.
Principios de los procedimientos:
La detección de antígeno por inmunohistoquímica (IHQ) es un proceso de dos etapas que implica, en primer lugar, la unión de un anticuerpo primario contra el antígeno de interés y, segundo, la detección del anticuerpo unido por un cromógeno. El anticuerpo primario puede ser usado en IHQ, usando técnicas manuales o mediante el Sistema de tinción de Diagnostic BioSystems Automated Montage 360™.
Dilución del anticuerpo primario:
Los anticuerpos listos para usar de Diagnostic BioSystems, han sido optimizados para utilizarlos con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado y no requieren dilución adicional. La dilución adicional puede resultar en la pérdida de sensibilidad. El usuario debe validar cualquier cambio.
Los anticuerpos concentrados de Diagnostic BioSystems, deben diluirse de acuerdo con el procedimiento técnico, cuando se utilizan con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado. El uso de cualquiera de los métodos de detección distintos a los sistemas y protocolos recomendados requiere validación por el usuario. Las diluciones de anticuerpos deben ajustarse apropiadamente y verificarse de acuerdo con el sistema de detección utilizado.
Materiales necesarios, pero no suministrados:
Algunos de los reactivos y materiales necesarios para IHQ, no se proporcionan. Reactivos de pretratamiento, sistemas de detección, reactivos de control y otros reactivos auxiliares, están disponibles con Diagnostic BioSystems. Por favor diríjase a la página web de Diagnostic BioSystems, www.dbiosys.com.
Almacenamiento y manipulación:
Almacenar a 2-8 °C. Este anticuerpo es adecuado para su uso hasta la fecha de caducidad cuando se almacena a 2-8 °C. No utilice el producto después de la fecha de caducidad impresa en el vial. Si los reactivos se almacenan en condiciones distintas de las especificadas aquí, deben ser verificadas por el usuario. Los reactivos deben utilizarse prontamente. Las porciones no utilizadas de precipitado de anticuerpos deben desecharse después de un día.
La presencia de precipitado o un olor inusual indica que el anticuerpo se ha deteriorado y no debe utilizar.
Controles positivos y negativos:
Los controles positivos y negativos se deben ejecutar simultáneamente con todas las muestras de pacientes. Si se observa una tinción inesperada que no puede explicarse por las variaciones en los procedimientos de laboratorio y se sospecha un problema con el anticuerpo, póngase en contacto con Soporte Técnico de Diagnostic BioSystems al (925) 484-3350, extensión 2 o techsupport@dbiosys.com.
Recogida y preparación de muestras:
Los tejidos fijados en formalina al 10% son adecuados para uso antes de la inmunocoloración. Consultar las referencias (Kiernan, 1981: Sheehan y Hrapchak, 1980) para más detalles sobre la preparación de muestras.
Se recomienda al usuario validar el uso de los productos con sus muestras de tejido preparado y manipularlas de acuerdo con sus prácticas de laboratorio.
Precauciones:
Este anticuerpo contiene menos del 0,1% de azida sódica. Las concentraciones de menos de 0,1% no son materiales peligrosos notificados según US 29 CFR 1910.1200, OSHA de Comunicación de Riesgos y la Directiva 91/155 / CE. El azida de sodio (NaN3) usando tubo con conservante es tóxico si se ingiere. La azida de sodio puede reaccionar con tuberías de plomo o cobre y para formar azidas metálicas altamente explosivas. La eliminación, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la acumulación de azida en las cañerías. (Centro Nacional de Enfermedades, 1976, Instituto Nacional de Seguridad y Salud Ocupacional, 1976). Las soluciones que contengan materiales explosivos a ellos, deben ser manejados con cuidado y desechos de pipetear reactivos con la boca y evitar el contacto con la piel y las membranas mucosas con los reactivos y muestras. Si los reactivos o muestras entran en contacto con zonas sensibles, lavar con cantidades copiosas de agua. La contaminación microbiana de los reactivos puede resultar en un aumento de la tinción no específica. Los tiempos de incubación o temperaturas diferentes de los especificados puede dar resultados erróneos. El usuario debe validar cualquier cambio. El MSDS está disponible bajo petición.
El tratamiento de los tejidos antes de la tinción:
Colocar los portaobjetos en la solución de recuperación de antígeno recomendada usando el Sistema de recuperación de antígeno de Diagnostic BioSystems, Montage Opus™. Permitir enfriar las laminillas durante 20 minutos antes de la tinción.
Procedimiento de tinción:
Consulte la siguiente tabla para obtener las condiciones recomendadas específicamente para este anticuerpo. Consulte el sistema de detección de Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus de dos pasos, o Sistema de Detección de Montage PolyVue™ Plus™ Auto para obtener orientación sobre los protocolos de tinción específicos u otros requisitos.
| Parámetro | Recomendaciones Diagnostic BioSystems |
|---|---|
| Control positivo | Amígdalas, carcinoma de células renales, linfoma folicular |
| Dilución del concentrado | 1:50 – 1:100 |
| El pretratamiento | Citrato Buffer pH 6,0 |
| Tiempo de incubación y temperatura | 30 min @ RT |
| Sistema de Detección | Sistema de Detección de dos pasos PolyVue™ Plus – o Sistema de detección automática Montage PolyVue Plus™ para usar con el Sistema Montage 360 |
| Tipo de tejido | FFPE |
Control de calidad:
Consulte las Normas de Calidad del CLSI para el Diseño e Implementación de ensayos de inmunohistoquímica; Pauta aprobada Segunda edición (E / LA28-A2) CLSI Wayne, PA EE.UU. (www.clsi.org). 2011.
Localización celular:
Citoplasma, membrana celular
Limitaciones del procedimiento:
La inmunohistoquímica es una técnica compleja que implica ambos métodos de detección histológicos e inmunológicos. El procesamiento de tejidos y la manipulación antes de la inmuno-tinción también puede causar resultados inconsistentes. Las variaciones en la fijación y la incrustación o de la naturaleza inherente del tejido pueden causar variaciones en los resultados (Nadji y Morales, 1983). La actividad de la peroxidasa endógena o actividad pseudoperoxidasa en los eritrocitos y la biotina endógena pueden causar tinción no específica en función del sistema de detección utilizado. Los tejidos que contienen superficie de la hepatitis B antígeno (HBsAg) pueden dar un falso positivo con los sistemas de peroxidasa de rábano (Omata et al, 1980). Una contra tinción y preparaciones inadecuadas pueden comprometer la interpretación de los resultados.
Características de presentación
La dilución optima del anticuerpo y los protocolos para una aplicación específica pueden variar. Estos incluyen, pero no se limitan a: la fijación, el método de recuperación de calor, los tiempos de incubación, y el espesor de sección de tejido y el kit de detección utilizado. Debido a la sensibilidad superior de estos reactivos únicos, los tiempos y los títulos de listados de incubación recomendados no son aplicables a otros sistemas de detección, ya que los resultados pueden variar. Las recomendaciones y los protocolos de hoja de datos se basan en el uso exclusivo de los productos Diagnostic BioSystems. En última instancia, es responsabilidad del investigador el determinar las condiciones óptimas. Estos productos son herramientas que pueden utilizarse para la interpretación de los resultados morfológicos en conjunción con otras pruebas de diagnóstico y los datos clínicos pertinentes por un patólogo cualificado.
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