A20 (A-12) Anticuerpo monoclonal de Ratón - Zebra Genetics Especialistas en Biotecnología y Equipos de Laboratorio.

Inmunógeno: Levantado contra aminoácidos 1-100 de A20 de origen humano. Clon: A-12 Especie: Ratón Isotipo: IgG2a, kappa Diluyente Primario de Anticuerpos: K004

La concentración de Ig específica del lote disponible a petición.

Catálogo:

Mob598: Anticuerpo concentrado para su uso con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos.
PDM598: Anticuerpo listo para usar con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos.

Uso previsto: Para uso diagnóstico in vitro. Este producto es intendido para inmunohistoquímica cualitativa con tejidos normales y neoplásicos fijados con formalina, embebidos en parafina, vistos bajo microscopía de luz. La interpretación clínica de los resultados de la tinción debe ser acompañada de estudios histológicos con controles adecuados. Las historias clínicas de los pacientes y otras pruebas diagnósticas pertinentes deben ser utilizadas por una persona calificada al evaluar e interpretar los resultados.

Resumen y explicación: El anticuerpo A20 (A-12) es un anticuerpo monoclonal de alta calidad que reconoce específicamente A20, también conocido como TNFAIP3 (inducido por TNF) o una proteína de unión al zinc de 80kDa. A20 se induce por el factor de necrosis tumoral (TNF) e interleucina 1 (IL-1), actuando como un regulador negativo clave de la expresión del gen del factor nuclear kappa B (NFkB). Inhibiendo la activación de NFkB, A20 juega un papel crucial en la terminación de las respuestas de NFkB a varios estímulos. Aunque la región C-terminal de A20 contiene siete dominios de dedos de zinc, solo cuatro de estos dominios son necesarios para la inhibición de la activación de NFkB inducida por TNF. A20 también interactúa con otras proteínas como TRAF2, TRAF6 y la quinasa IKKβ, y puede inhibir la muerte celular. TXBP151, una nueva proteína de unión a A20, también puede mediar la función anti-apoptótica de A20. Involucrado en la retroalimentación negativa de la señal de transducción, A20 y las proteínas de unión a A20 han emergido como herramientas útiles para la investigación de una variedad de enfermedades.

Formato: Este producto se suministra como una inmunoglobulina purificada y contiene azida sódica como conservante.

Principios de los Procedimientos: La detección de antígeno por inmunohistoquímica (IHQ) es un proceso de dos pasos que implica, en primer lugar, la unión de un anticuerpo primario contra el antígeno de interés y, en segundo lugar, la detección del anticuerpo unido por un cromógeno. El anticuerpo primario puede ser usado en IHQ usando técnicas manuales o utilizando el Sistema de Tinción Automatizado Diagnostic BioSystems Montage 360™.

Dilución del Anticuerpo Primario: Los anticuerpos listos para usar de Diagnostic BioSystems han sido optimizados para utilizarlos con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado y no requieren dilución adicional. La dilución adicional puede resultar en la pérdida de sensibilidad. El usuario debe validar cualquier cambio. Los anticuerpos concentrados de Diagnostic BioSystems deben diluirse de acuerdo con el procedimiento de tinción recomendado. El uso de cualquier método de detección diferente a los sistemas y protocolos recomendados requiere validación por el usuario. Las diluciones de anticuerpos deben ajustarse apropiadamente y verificarse de acuerdo con el sistema de detección utilizado.

Materiales Requeridos Pero No Proveídos: Algunos de los reactivos y materiales necesarios para IHC no son proporcionados. Reactivos de pretratamiento, sistemas de detección, reactivos de control y otros reactivos auxiliares están disponibles con Diagnostic BioSystems. Por favor, consulte la página web de Diagnostic BioSystems en www.dbiosys.com.

Almacenamiento y Manipulación: Almacenar a 2-8 °C. Este anticuerpo es adecuado para su uso hasta la fecha de caducidad indicada cuando se almacena a 2-8 °C. No use el producto después de la fecha de caducidad impresa en el vial. Si los reactivos se almacenan en condiciones diferentes a las aquí especificadas, deben ser verificadas por el usuario. Los reactivos diluidos deben ser utilizados prontamente. Las porciones no utilizadas de la preparación de anticuerpos deben ser descartadas después de un día. La presencia de precipitado o un olor inusual indica que el anticuerpo está deteriorado y no debe ser utilizado.

Los controles positivos y negativos deben ser ejecutados simultáneamente con todas las muestras de los pacientes. Si se observa una tinción inesperada que no puede ser explicada por variaciones en los procedimientos de laboratorio y se sospecha un problema con el anticuerpo, contacte al Soporte Técnico de Diagnostic BioSystems al (925) 484-3350, extensión 2 o techsupport@dbiosys.com.

Recogida y Preparación de Muestras: Los tejidos fijados en formalina al 10% son adecuados para su uso antes de la inclusión en parafina. Consulte las referencias (Kiernan, 1981; Sheehan y Hrapchak, 1980) para más detalles sobre la preparación de muestras. Se recomienda que el usuario valide el uso de los productos con sus muestras de tejido preparadas y manipuladas de acuerdo con sus prácticas de laboratorio.

Precauciones: Este producto es de un solo uso, no estéril, en dispositivo de diagnóstico in vitro. Este anticuerpo contiene menos del 0.1% de azida sódica. Las concentraciones menores del 0.1% no son materiales peligrosos notificables según 29 CFR 1910.1200, OSHA de Comunicación de Riesgos y la Directiva CE 91/155. La azida sódica (NaN3) usada como conservante es tóxica si se ingiere. El azida sódica puede reaccionar con tuberías de plomo y cobre para formar azidas metálicas altamente explosivas. Para la disposición, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la acumulación de azida en las tuberías. (Centro para el Control de Enfermedades, 1976, Instituto Nacional de Seguridad y Salud Ocupacional, 1976). Las muestras, antes y después de la fijación y todos los materiales expuestos a ellas, deben ser manejados como si fueran capaces de transmitir infecciones y desechar con las precauciones adecuadas. Nunca pipetear reactivos con la boca y evitar el contacto con la piel y mucosas. Si los reactivos o muestras entran en contacto con áreas sensibles, lavar con abundante agua. La contaminación microbiana de los reactivos puede resultar en un aumento de la tinción no específica. Los tiempos de incubación y temperaturas diferentes a los especificados pueden resultar en resultados erróneos. El usuario debe validar cualquier cambio. El MSDS está disponible a petición.

Tratamiento de Tejidos Antes de la Tinción: Colocar las laminillas en la solución de recuperación de antígeno recomendada utilizando el Sistema de Recuperación de Antígeno Diagnostic BioSystems Montage Opus™. Permitir que las laminillas se enfríen durante 20 minutos antes de la tinción.

Procedimiento de Tinción: Consultar la siguiente tabla para obtener las condiciones recomendadas específicamente para este anticuerpo. Consultar el Sistema de Detección de dos pasos PolyVue™ Plus o el Sistema de Detección Automatizado Montage PolyVue Plus™ para obtener orientación sobre los protocolos de tinción específicos u otros requisitos.

Parámetro:

Control positivo: Carcinoma de pulmón
Dilución del concentrado: 1:50-1:200
Pretratamiento: EDTA Buffer pH 8.0 (Manual/Montage)
Tiempo de incubación y temperatura: 30 min a RT
Sistema de Detección: Sistema de Detección de dos pasos PolyVue™ Plus o Sistema de Detección Automatizado Montage PolyVue Plus™ para usar con el Sistema de Tinción Automatizado Montage 360.
Tipo de tejido: FFPE

Control de Calidad: Consultar las Normas de Calidad de CLSI para el Diseño e Implementación de ensayos de inmunohistoquímica; Pauta aprobada Segunda Edición (I/LA28-A2) CLSI Wayne, PA EE.UU. (www.clsi.org). 2011.

Solución de Problemas: Contacto con el soporte técnico de Diagnostic BioSystems al (925) 484-3350, extensión 2, techsupport@dbiosys.com o con su Distribuidor local para informar sobre coloración inusual.

Localización Celular: Citoplasmático.

Limitaciones del Procedimiento: La inmunohistoquímica es una técnica compleja que involucra métodos tanto histológicos como de detección inmunológica. El procesamiento y manipulación de tejidos antes de la inmunotinción también puede causar resultados inconsistentes. Las variaciones en la fijación y la inclusión, o la naturaleza inherente del tejido, pueden causar variaciones en los resultados (Nadji y Morales, 1983). La actividad de la peroxidasa endógena o actividad pseudoperoxidasa en eritrocitos y biotina endógena pueden causar tinción no específica dependiendo del sistema de detección utilizado. Los tejidos que contienen superficie de hepatitis B antígeno (HBsAg) pueden dar un falso positivo con los sistemas de peroxidasa de rábano (Omata et al., 1980). Contra tinción y preparaciones inadecuadas pueden comprometer la interpretación de resultados.

Características de Presentación: La dilución óptima del anticuerpo y los protocolos para una aplicación específica pueden variar. Estos incluyen, pero no se limitan a: fijación, método de recuperación de calor, tiempos de incubación, espesor de la sección del tejido y kit de detección utilizado. Debido a la sensibilidad superior de estos reactivos únicos, los tiempos y los títulos de las listas de incubación recomendados no son aplicables a otros sistemas de detección, ya que los resultados pueden variar. Las recomendaciones y protocolos de hoja de datos se basan en el uso exclusivo de los productos Diagnostic BioSystems. En última instancia, es responsabilidad del investigador determinar las condiciones óptimas. Estos productos son herramientas que pueden utilizarse para la interpretación de los resultados morfológicos en conjunto con otras pruebas de diagnóstico y los datos clínicos pertinentes por un patólogo calificado.

Referencias: