Beta-Catenin - Anticuerpo Policlona de Conejo - Zebra Genetics Especialistas en Biotecnología y Equipos de Laboratorio.

Beta-Catenin – Anticuerpo Policlona de Conejo, RP080, RP080-05, RP080-01. Esta ficha técnica es aplicable a todos los tamaños (volumen) del producto. El volumen real del producto se indica en el vial o el frasco. Documento: DS-0047-C. Fecha efectiva: 01/09/2016.

Inmunógeno: Un péptido sintético derivado del centro de la proteína de la catenina β. Especie: Conejo. Diluyente Primario de Anticuerpos: K004. La concentración de la especificidad del lote disponible a petición.

Catálogo: RP080. Descripción: 1 ml Anticuerpo concentrado para su uso con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos. Catálogo: RP080-05. Descripción: 0.5 ml Anticuerpo concentrado para su uso con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos. Catálogo: RP080-01. Descripción: 0.1 ml Anticuerpo concentrado para su uso con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos.

Uso Previsto: Para uso diagnóstico in vitro. Este producto está destinado para inmunohistoquímica cualitativa con secciones de tejidos, fijado con formalina, embebidos en parafina, normal y neoplásico para ser visto por microscopía de luz. La interpretación clínica de los resultados de la tinción debe ir acompañada de los estudios histológicos con los controles adecuados. Las historias clínicas de los pacientes y otras pruebas diagnósticas pertinentes deben ser utilizados por una persona(s) calificada al evaluar e interpretar los resultados.

Resumen y Explicación: Las cateninas forman citoplasmáticas estructuralmente relacionadas que han sido clasificadas como alfa (α), beta (β), y gamma (γ). Estas proteínas se unen a la cola citoplasmática intracelular extrema conservada de la cadherina E. Juntas, las cateninas y las cadherinas desempeñan un papel como importantes mediadores de la adhesión celular. β-catenina se asocia con la porción citoplásmica de la E-cadherina, que es necesaria para la función de la E-cadherina como molécula de adhesión.

β-catenina también se ha encontrado en complejos con la proteína supresora de tumores APC. En los tejidos normales, β-catenina está localizada en la membrana de las células epiteliales, lo que es consistente con su papel en el complejo de adhesión celular. En la neoplasia ductal de mama, β-catenina se localiza generalmente en las membranas celulares. Sin embargo, en la neoplasia lobular, una marcada redistribución de β-catenina de lo citoplásmico al lugar a un patrón citoplasmático difuso. La inmunotinción de β-catenina y E-cadherina ayuda a identificar con precisión las neoplasias ductales de mama, incluida la distinción entre el carcinoma ductal in situ de bajo grado (CDIS) y el carcinoma lobular. Además, algunos adenocarcinomas rectales y gástricos demuestran citoplasmas difusos de β-catenina y la falta de tinción membranosa, imitando el patrón de tinción observado en los carcinomas lobulares de mama.

Formato: Fracción de inmunoglobulina purificada del anticuerpo de conejo contra la catenina β humana que contiene azida sódica como conservante.

Principios de los Procedimientos: La detección de antígeno por inmunohistoquímica (IHQ) es un proceso de dos etapas que implica en primer lugar, la unión de un anticuerpo primario contra el antígeno de interés, y segundo, la detección del anticuerpo unido por un cromógeno. El anticuerpo primario puede ser usado en IHQ, usando técnicas manuales o mediante el Sistema de Tinción de Diagnostic BioSystems Automated Montage 360™.

Dilución del Anticuerpo Primario: Los anticuerpos listos para usar de Diagnostic BioSystems han sido optimizados para utilizarlos con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado y no requieren dilución adicional. La dilución adicional puede resultar en la pérdida de sensibilidad. El usuario debe validar cualquier cambio.

Los anticuerpos concentrados de Diagnostic BioSystems deben diluirse de acuerdo con el procedimiento de tinción, cuando se utilizan con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado. El uso de cualquiera de los métodos de detección distintos a los sistemas y protocolos recomendados requiere validación por el usuario. Las diluciones de anticuerpos deben ajustarse apropiadamente y verificarse de acuerdo con el sistema de detección utilizado.

Materiales Necesarios, pero No Suministrados: Algunos de los reactivos y materiales necesarios para IHQ no se proporcionan. Reactivos de pretratamiento, sistemas de detección, reactivos de control y otros reactivos auxiliares están disponibles en Diagnostic BioSystems. Para más información, por favor diríjase a la página web de Diagnostic BioSystems, www.dbiosys.com.

Almacenamiento y Manipulación: Almacenar a 2-8°C. Este anticuerpo es adecuado para su uso hasta la fecha de caducidad cuando se almacena a 2-8°C. No utilice el producto después de la fecha de caducidad impresa en el vial. Si los reactivos se almacenan en condiciones distintas a las especificadas aquí, deben ser verificados para el uso. Los reactivos diluidos deben utilizarse con prontitud. Las porciones no utilizadas de preparación de anticuerpos deben desecharse después de un día. La presencia de precipitado o un olor inusual indica que el anticuerpo se deteriora y no se debe utilizar.

Los controles positivos y negativos deben ejecutarse simultáneamente con todas las muestras de pacientes. Si se observa una tinción inesperada que no puede explicarse por variaciones en los procedimientos de laboratorio y se sospecha un problema con el anticuerpo, póngase en contacto con el Soporte Técnico de Diagnostic BioSystems al (925) 484-3350, extensión 2 o techsupport@dbiosys.com.

Recogida y Preparación de Muestras: Los tejidos fijados en formalina al 10% son adecuados para uso antes de la inclusión en parafina. Consultar las referencias (Kiernan, 1981: Sheehan & Hrapchak, 1980) para más detalles sobre la preparación de muestras. Se recomienda al usuario validar el uso de los productos con sus muestras de tejido propio y manejados de acuerdo con sus prácticas de laboratorio.

Precauciones: Este anticuerpo contiene menos del 0.1% de azida sódica. Las concentraciones de menos del 0.1% no son materiales peligrosos notificados según US 29 CFR 1910.1200, OSHA de Comunicación de Riesgos y la Directiva 91/155 / CE. El azida de sodio (NaN3) usado como un conservante es tóxico si se ingiere. El azida de sodio puede reaccionar con tuberías de plomo y cobre para formar azidas metálicas altamente explosivas. Tras la eliminación, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la acumulación de azida en las cañerías. (Centro para el Control de Enfermedades, 1976, Instituto Nacional de Seguridad y Salud Ocupacional, 1976). Las muestras, antes y después de la fijación y todos los materiales expuestos a ellas, deben ser manejados como si fueran capaces de transmitir infecciones y desecharse en las precauciones adecuadas. Nunca pipetear reactivos con la boca y evitar el contacto con la piel y las membranas mucosas con los reactivos y muestras. Si los reactivos o muestras entran en contacto con áreas sensibles, lavar con grandes cantidades de agua. La contaminación microbiana de los reactivos puede resultar en tinción incorrecta. Tiempos de incubación o temperaturas diferentes a las especificadas pueden dar resultados erróneos. El usuario debe validar cualquier cambio. El MSDS está disponible bajo solicitud.

El Tratamiento de los Tejidos Antes de la Tinción: Colocar los portaobjetos en la solución de recuperación de antígeno recomendado usando el Sistema de Recuperación de Antígenos Montage Opus™ de Diagnostic BioSystems. Permitir enfriar las láminillas durante 20 minutos antes de la tinción.

Procedimiento de Tinción: Consulte la siguiente tabla para obtener las condiciones recomendadas específicamente para este anticuerpo. Consulte el Sistema de Detección de Dos Pasos PolyVue™ Plus de Diagnostic BioSystems o el Sistema de Detección Automática PolyVue Plus™ para el Sistema Montage 360 para obtener orientación sobre protocolos de tinción específicos u otros requisitos.

Parámetro: Control positivo. Recomendaciones Diagnostic BioSystems: Carcinoma de mama, Intestino grueso. Parámetro: Dilución del concentrado. Recomendaciones Diagnostic BioSystems: 1:50 – 1:100. Parámetro: El pretratamiento. Recomendaciones Diagnostic BioSystems: Buffer EDTA pH 8.0. Parámetro: Tiempo de incubación y temperatura. Recomendaciones Diagnostic BioSystems: 30 min @ RT. Parámetro: Sistema de detección. Recomendaciones Diagnostic BioSystems: Sistema de Detección de Dos Pasos PolyVue™ Plus o Sistema de Detección Automática PolyVue Plus™ para el Sistema Montage 360. Parámetro: Tipo de tejido. Recomendaciones Diagnostic BioSystems: FFPE.

Control de Calidad: Consulte las Normas de Calidad del CLSI para el Diseño e Implementación de Ensayos de Inmunohistoquímica; Pauta Aprobada Segunda Edición (I/LA28-A2) CLSI Wayne, PA EE.UU. (www.clsi.org). 2011.

Solución de Problemas: Contacte al Soporte Técnico de Diagnostic BioSystems al (925) 484-3350, extensión 2, techsupport@dbiosys.com o a su distribuidor local para reportar tinción inusual.

Localización Celular: Citoplasma y membrana celular

Limitaciones del Procedimiento: La inmunohistoquímica es una técnica compleja que implica tanto métodos de detección histológicos como inmunológicos. El procesamiento y manejo de los tejidos antes de la inmunotinción también puede causar resultados inconsistentes. Las variaciones en la fijación y en la inclusión o la naturaleza inherente del tejido pueden causar variaciones en los resultados (Nadji y Morales, 1983). La actividad peroxidasa endógena o la actividad pseudoperoxidasa en los eritrocitos y la biotina endógena pueden causar tinción inespecífica dependiendo del sistema de detección utilizado. Los tejidos que contienen el Antígeno de Superficie de la Hepatitis B (HBsAg) pueden dar un falso positivo con los sistemas de peroxidasa de rábano (Omata et al, 1980). La contracoloración y el montaje inadecuados pueden comprometer la interpretación de los resultados.

Características de Presentación: La dilución óptima del anticuerpo y los protocolos para una aplicación específica pueden variar. Estos incluyen, pero no se limitan a: fijación, método de recuperación de calor, tiempos de incubación, grosor de la sección de tejido y kit de detección utilizado. Debido a la sensibilidad superior de estos reactivos únicos, los tiempos de incubación y títulos listados no son aplicables a otros sistemas de detección y deben ser validados por el usuario. Las recomendaciones y protocolos de la hoja de datos se basan en el uso exclusivo de los productos de Diagnostic BioSystems. En última instancia, es responsabilidad del investigador el determinar las condiciones óptimas. Estos productos son herramientas que pueden ser utilizadas para la interpretación de hallazgos morfológicos en conjunto con otras pruebas de diagnóstico y datos clínicos pertinentes por un patólogo calificado.

Referencias: