C-Myc

C-Myc es un anticuerpo monoclonal de ratón, específico para la identificación del factor de transcripción c-Myc en estudios de inmunohistoquímica. Este anticuerpo está disponible en los siguientes formatos:

• Mob231: 1 ml Anticuerpo concentrado para su uso con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos
• Mob231-05: 0.5 ml Anticuerpo concentrado para su uso con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos
• PDM211: 6 ml de Anticuerpo listo para usar con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos
• PDM211-10MM: Anticuerpo con código de barras de 10 ml listo para usar con Diagnostic BioSystems Montage PolyVue™ Plus Sistema de Auto Detección & Montage™ Sistema 360
• PDM211-25: 25 ml de Anticuerpo listo para usar con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos
• PDM211-100: 100 ml de Anticuerpo listo para usar con Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus – Sistema de Detección de dos pasos

Fecha de Efectividad: 02/07/2017 Documento: DS-0133-B

Inmunógeno: Un péptido sintético, correspondiente a aa 408-439 (AEEKLISEEDLLRKRREQLKHKLE) del terminal C del c-Myc humano, acoplado a KLH. Clon: 9E10 Especie: Ratón Isotipo: IgG1, Kappa Diluyente Primario de anticuerpos: K004

Uso previsto Para uso diagnóstico in vitro.

Resumen y explicación Este anticuerpo reconoce un factor de transcripción de 64-67kDa, identificado como c-Myc. Su epítope se extiende entre aa 410-419 (EQKLISEEDL) que es una porción específica de alta región de c-Myc relativa a proteína c-Myc humana. Este anticuerpo no muestra ninguna reacción cruzada con v-Myc. c-Myc está involucrado en el control de la proliferación y diferenciación y está amplificado y/o sobreexpresado en una variedad de tumores. La sobreexpresión de la proteína c-Myc se produce frecuentemente en las células luminales de la neoplasia intraepitelial de la próstata, así como en la mayoría de los tumores primarios, carcinomas y enfermedades metastásicas.

Formato Este producto se suministra como un sobrenadante de cultivo de tejidos y contiene azida sódica como conservante.

Principios de los procedimientos La detección de antígeno por inmunohistoquímica (IHQ) es un proceso de dos etapas que implica en primer lugar, la unión de un anticuerpo primario contra el antígeno de interés, y segundo, la detección del anticuerpo unido por un cromógeno. El anticuerpo primario puede ser usado en IHQ, usando técnicas manuales o mediante el Sistema de tinción de Diagnostic BioSystems Automated Montage 360™.

Dilución del anticuerpo primario Los anticuerpos listos para usar de Diagnostic BioSystems, han sido optimizados para utilizarlos con el Sistema de Detección de Diagnostic BioSystems recomendado y no requieren dilución adicional. La dilución adicional puede resultar en la pérdida de sensibilidad. El usuario debe validar cualquier cambio.

Materiales necesarios, pero no suministrados Algunos de los reactivos y materiales necesarios para IHQ, no se proporcionan. Reactivos de pretratamiento, sistemas de detección, reactivos de control y otros reactivos auxiliares, están disponibles con Diagnostic BioSystems. Por favor dirigirse a la página web de Diagnostic BioSystems, www.dbiosys.com.

Almacenamiento y manipulación Almacenar a 2-8°C. Este anticuerpo es adecuado para su uso hasta la fecha de caducidad cuando se almacena a 2-8°C. No utilice el producto después de la fecha de caducidad impresa en el vial. Si los reactivos se almacenan en condiciones distintas de las especificadas aquí, deben ser verificados por el usuario. Los reactivos diluidos deben utilizarse con prontitud. Las porciones no utilizadas de preparación de anticuerpos deben desecharse después de un día.

Recogida y preparación de muestras Los tejidos fijados en formalina al 10% son adecuados para uso antes de la inclusión en parafina. Consultar las referencias (Kiernan, 1981: Sheehan y Hrapchak, 1980) para más detalles sobre la preparación de muestras. Se recomienda al usuario validar el uso de los productos con sus muestras de tejido preparado y manipularlas de acuerdo con sus prácticas de laboratorio.

Precauciones Este anticuerpo contiene menos del 0,1% de azida sódica. Las concentraciones de menos de 0,1% no son materiales peligrosos notificados según US 29 CFR 1910.1200, OSHA de Comunicación de Riesgos y la Directiva 91/155 / CE. El azida de sodio (NaN3) usado como un conservante es tóxico si se ingiere. El azida de sodio puede reaccionar con tuberías de plomo y cobre para formar azidas metálicas altamente explosivas. Tras la eliminación, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la acumulación de azida en las cañerías. (Centro para el Control de Enfermedades, 1976, Instituto Nacional de Seguridad y Salud Ocupacional, 1976). Las muestras, antes y después de la fijación y todos los materiales expuestos a ellos, deben ser manejados como si fueran capaces de transmitir infecciones y desecharse con las precauciones adecuadas. Nunca pipetear reactivos con la boca y evitar el contacto con la piel y las membranas mucosas con los reactivos y muestras. Si los reactivos o muestras entran en contacto con zonas sensibles, lavar con cantidades copiosas de agua. La contaminación microbiana de los reactivos puede resultar en un aumento de la tinción no específica. Los tiempos de incubación o temperaturas diferentes de los especificados puede dar resultados erróneos. El usuario debe validar cualquier cambio. El MSDS está disponible bajo petición.

El tratamiento de los tejidos antes de la tinción Colocar los portaobjetos en la solución de recuperación de antígeno recomendado usando el Sistema de recuperación de antígeno de Diagnostic BioSystems, Montage Opus™. Permitir enfriar las laminillas durante 20 minutos antes de la tinción.

Procedimiento de tinción Consulte la siguiente tabla para obtener las condiciones recomendadas específicamente para este anticuerpo. Consulte el sistema de detección de Diagnostic BioSystems PolyVue™ Plus de dos pasos, o Sistema de Detección de Montage PolyVue Plus™ Auto para obtener orientación sobre los protocolos de tinción específicos u otros requisitos.

Parámetro	Recomendaciones Diagnostic BioSystems
Control positivo	Carcinoma de mama, adenocarcinoma de colon
Dilución del concentrado	1:50-1:100
El pretratamiento	Citrato Buffer pH 6,0
Tiempo de incubación y temperatura	30 min @ RT
Sistema de Detección	Sistema de Detección de dos pasos PolyVue™ Plus – o Sistema de detección automática Montage PolyVue Plus™ para usar con el Montage Sistema 360
Tipo de tejido	FFPE

Control de calidad Consulte las Normas de Calidad del CLSI para el Diseño e Implementación de ensayos de inmunohistoquímica; Pauta aprobada Segunda edición (E / LA28-A2) CLSI Wayne, PA EE.UU. (www.clsi.org). 2011.

Localización celular Nuclear

Limitaciones del procedimiento La inmunohistoquímica es una técnica compleja que implica ambos métodos de detección histológicos e inmunológicos. El procesamiento de tejidos y la manipulación antes de la inmuno-tinción también puede causar resultados inconsistentes. Las variaciones en la fijación y la incrustación o de la naturaleza inherente del tejido pueden causar variaciones en los resultados (Nadji y Morales, 1983). La actividad de la peroxidasa endógena o actividad pseudoperoxidasa en los eritrocitos y la biotina endógena pueden causar tinción no específica en función del sistema de detección utilizado. Los tejidos que contienen superficie de la hepatitis B antígeno (HBsAg) pueden dar un falso positivo con los sistemas de peroxidasa de rábano (Omata et al, 1980). Una contra tinción y preparaciones inadecuadas pueden comprometer la interpretación de los resultados.

Características de presentación
La dilución optima del anticuerpo y los protocolos para una aplicación específica pueden variar. Estos incluyen, pero no se limitan a: la fijación, el método de recuperación de calor, los tiempos de incubación, y el espesor de sección de tejido y el kit de detección utilizado. Debido a la sensibilidad superior de estos reactivos únicos, los tiempos y los títulos de listados de incubación recomendados no son aplicables a otros sistemas de detección, ya que los resultados pueden variar. Las recomendaciones y los protocolos de hoja de datos se basan en el uso exclusivo de los productos Diagnostic BioSystems. En última instancia, es responsabilidad del investigador el determinar las condiciones óptimas. Estos productos son herramientas que pueden utilizarse para la interpretación de los resultados morfológicos en conjunción con otras pruebas de diagnóstico y los datos clínicos pertinentes por un patólogo cualificado.

Referencias:
i) Campbell et al.. J Biol Chem 267: 9321, 1992.
ii) Evan et al. Molecular and Cell Biology 5: 3610, 1985.
iii) Hu et al. Science 268: 100, 1995.